TP extraction de l'ADN des cellules d'oignon

Geoffray DESMIDT - Lycée Romain Rolland (Clamecy) -

Ce TP s’inscrit dans la partie du programme de seconde : « Cellule, ADN et unité du vivant »

puce Matériels indispensables : un demi oignon par binôme, une moulinette à persil, une passoire, 2 pots de yaourt en verre, un tube à essais, un verre de montre, une paire de pince, une cuillère à café, de l’eau tiède, du sel de cuisine, du liquide vaisselle, du vert de méthyle.

Protocole expérimental :

1/ Désorganisation de la paroi végétale

Etape 1 : Placer la moulinette à persil contenant le bulbe d’oignon au-dessus du grand récipient.
Etape 2 : Hacher l’oignon.
Etape 3 : Préparer dans le pot à yaourt juste assez d’eau tiède pour recouvrir le hachis d’oignon.
Etape 4 : Y ajouter deux pincées de sel de cuisine (NaCl).
Etape 5 : Verser l’eau tiède salée sur le hachis d’oignon, il doit être juste recouvert, mélanger à l’aide d’une cuillère.

2/ Désorganisation et dissolution des membranes

Etape 6 : Ajouter 2 cuillères à café de liquide vaisselle et mélanger en tournant lentement. Le mélange devient visqueux. Attendre 5 minutes.
Etape 7 : Verser le tout dans la passoire au dessus du pot de yaourt vide, un liquide visqueux s’écoule. Presser pour obtenir le maximum de liquide.

3/ Isolement et coloration de l’ADN

Etape 8 : Quand le liquide a fini de s’écouler, verser un peu de ce liquide dans un tube à essais.
Etape 9 : Ajouter dans le tube une quantité égale d’alcool à brûler. Attention : opération délicate, placer l’extrémité du bec le long de la paroi et appuyer doucement.
Etape 10 : Attendre 15 minutes, une substance se forme dans l’alcool au contact des 2 liquides, c’est l’ADN qui précipite (il se forme ce que les biochimistes appellent la « méduse d’ADN »).
Etape 11 : Prélever la « méduse d’ADN », puis la déposer dans un verre de montre. Verser quelques gouttes de vert de méthyle dans le verre de montre afin d’y colorer l’ADN.
Etape 12 : Rincer à l’eau distillée pour montrer que la coloration verte persiste sur l’ADN.
Etape 13 : Le verre de montre peut être placé sur le rétroprojecteur pour être visible par toute la classe.